[ Pobierz całość w formacie PDF ]
Projekt współfinansowany ze środków Unii Europejskiej w ramach Europejskiego Funduszu Społecznego
„Wzbogacenie oferty edukacyjnej na studiach stacjonarnych II stopnia kierunku biotechnologia” -
projekt
realizowany przez Wydział Biologii i Nauk o Ziemi UMK w Toruniu
w ramach Priorytetu IV POKL 2007-2013, Poddziałanie 4.1.2
Transformacja szczepukarmiącegoHT115plazmidowym
DNA do wyciszenia genu kolagenu u
C. elegans
Agnieszka Mierek-Adamska
ZakładGenetyki
POPRZEDNIEWIZENI
L4440
dpy-10
elektroporacja
komórekDH5α
L4440
Któreztychkoloniibakteryjnychposiadająwektorze
wstawką(genem
dpy-10 C. elegans
)?
Identyfikacjakoloniibakteryjnejnioącejplazmidzewtawką,anieputyplazmid
PCR KOLONIJNY
L4440
wynik pozytywny
dpy-10
paratarterówpecyficznych
do wektora L4440
L4440
wynik negatywny
LIZA ALKALICZNA
nocnahodowlakomórekDH5α,uktórych
wczeniejpotwierdzonoobecnodplazmidu
zewtawką
osad bakterii
L4440
osad zawieszony w buforze
zglukozą,Trisem i EDTA
dpy-10
wymywanie DNA plazmidowego
liza buforem z SDS i NaOH
wiązanieDNplazmidowegodozłoża
krzemionkowego i odpłukaniezanieczyzczeo
renaturacja buforem z kwasem octowym
ELEKTROPORJSZZEPUKRMIĄEGOHT115
inkubacja na lodzie
nałożenienakuwety
do elektroporacji
plazmid
komórkikompetentne
wykonanie
elektroporacji
wyianienapłytkizpożywką
LBzampicyliną
inkubacja z SOC 3h
37°Czwytrząaniem
[ Pobierz całość w formacie PDF ]